NIF

EUROIMMUN Netiesioginė Imunofluorescencija: paprastas ir modernus metodas


Tyrimo principai

  • Autoantikūnams ar antikūnams prieš infekcijų sukėlėjus, ląsteles, audinių pjūvius arba prieš išvalytas, biochemiškai apibūdintas medžiagas nustatyti naudojami antigenų substratai.
  • Jeigu mėginys yra teigiamas, praskiestame serumo mėginyje esantys specifiniai antikūnai rišis su antigenais, sujungtais su kieta faze.
  • Antrame reakcijos etape susirišę antikūnai dažomi fluoresceinu žymėtais antikūnais prieš žmogaus imunoglobulinus bei fluorescencinio mikroskopo pagalba yra vizualizuojami. 
  • Teigiami mėginiai gali būti titruojami pakopomis. Tinkamiausias titravimo intervalas yra praskiedimo faktorius 3,162 (kvadratinė šaknis iš 10).  Tuo būdu, kas antro praskiedimo etapo metu vardiklyje esantis skaičius padidės 10 kartų (1:10, 1:32, 1:100, 1 : 320, 1 : 1000, 1 : 3200, 1 : 10000 ir t.t.).

 


 

  • Aukštas specifiškumas: teigiamų ir neigiamų mėginių sukeliamų signalų stiprumas smarkiai skiriasi. Kiekvienas prisijungęs antikūnas sukelia tipišką švytėjimą, kuris priklauso nuo individualių antigenų lokalizacijos.
  • Turimas visas kiekvieno originalaus substrato antigenų spektras leidžia nustatyti daug įvairių antikūnų; tuo būdu padidėja nustatymo dažnis.
  • Imunofluorescencija leidžia tuo pačiu metu nustatyti antikūnus prieš keletą biochemiškai skirtingų antigenų, esančių ant to paties biologinio substrato.
  • Netiesioginės imunofluorescencijos tyrimas – svarbiausias analitinis metodas, kuris naudojamas tuomet, kai paruošti atskirus antigenus imunofermentiniams tyrimams yra pernelyg komplikuota ar sunku. 

 


EUROIMMUN naujovės siekiant standartizuoti ir modernizuoti Netiesioginės Imunofluorescencijos Tyrimą

  • Aktyvavimo technika: fiziškai ar chemiškai aktyvinti dengiamieji stikleliai yra padengiami kultyvuotomis ląstelėmis arba audinių pjūviais. Užšaldyti audinių pjūviai yra fiksuojami ant stiklo paviršiaus kovalentinių ryšių pagalba, padidinant adheziją daugiau kaip 100 kartų  - tuo būdu apsaugant substratus nuo atitrūkimo.
  • BIOCHIP Technologija: dengiamieji stikleliai, padengti biologiniais substratais, įrenginio pagalba yra sukarpomi į milimetro dydžio fragmentus (BIOCHIP’us). Tokiu būdu iš vieno audinio pjūvio galima paruošti dešimt ar daugiau aukščiausios klasės bei identiškos kokybės preparatų, o kultyvuotų ląstelių substratų atveju – net keletą tūkstančių.
  • BIOCHIP Mosaics™: tame pačiame reakcijos laukelyje naudojant keletą vienas šalia kito esančių skirtingais substratais padengtų BIOCHIP’ų, galima tuo pačiu metu nustatyti antikūnus prieš įvairius organus ar infekcijų sukėlėjus. Tokiu būdu, santykinai nedidelių pastangų dėka galima sukurti išsamius antikūnų profilius, kurie leidžia nustatyti bei tarpusavyje palygint rezultatus, gautus naudojant  skirtingus substratus.
  • TITERPLANE™ Metodas: mėginiai ar reagentai yra lašinami į reagentų plokštelės reakcijų laukelius. Tuomet objektiniai stikleliai su BIOCHIP’ais yra įstatomi į reagentų plokštelės išpjovas, kur visi stiklelio BIOCHIP‘ai susiliečia su skysčiais ir kiekviena individuali reakcija prasideda tuo pačiu metu. Kadangi skysčiai yra uždaroje nedidelėje erdvėje, nereikia naudoti tradicinių „drėgmės kamerų“. 
 
 

 

Daugiau informacijos: www.euroimmun.com