BLOT

EUROIMMUN EUROLINE/Western Blotas: naujas metodas plataus antikūnų profilio tyrimui


Tyrimo Principas

  • Kaip kieta fazė yra naudojamos membranos juostelės, padengtos siauromis lygiagrečiomis kelių išgrynintų, biochemiškai apibūdintų antigenų linijomis. Membranos yra pritvirtintos prie sintetinės folijos.  
  • Jeigu mėginys yra teigiamas, praskiestame serumo mėginyje esantys specifiniai antikūnai rišis su antigenais, esančiais kietos fazės paviršiuje.
  • Antrojo inkubavimo etapo metu susirišę antikūnai nustatomi naudojant šarmine fosfataze žymėtus anti-žmogaus antikūnus.
  • Trečiojo etapo metu susirišę antikūnai išryškinami naudojant chromogeno/substrato tirpalą, kuris gali sukelti spalvinę reakciją. Jeigu serumo mėginyje yra specifinių antikūnų, atitinkamo antigeno juostelės vietoje atsiras tamsus ruoželis.
  • Spalvos intensyvumas yra proporcingas serumo mėginyje esančių antikūnų koncentracijai.
  • Priklausomai nuo naudojamų antigenų spektro, tampa įmanoma vienu metu bei tokiomis pačiomis sąlygomis analizuoti keletą vienas šalia kito esančių antikūnų. 

 


Lengvas naudojimas, patikimas ir paprastas įvertinimas

  • Kiekvienam serumo mėginiui inkubuojama atskira membranų juostelė.
  • Bendra tyrimo atlikimo trukmė – maždaug 105 minutės.
  • Inkubacija gali būti automatizuota naudojant EUROBlotMaster ar EUROBlotOne
  • Visi inkubacijos etapai vyksta kambario temperatūroje.
  • Antigenų ruoželiai yra išdėstyti tiksliai nustatytose vietose, o tai reiškia, kad tyrimo įvertinimas yra žymiai paprastesnis nei Westernblot.
  • Ant kiekvienos EUROLINE tyrimo juostelės esančio kontrolinio ruoželio nusidažymas patvirtina teisingą inkubacijos atlikimą.
  • Teigiamus ir neigiamus rezultatus galima lengvai ir patikimai atskirti vienus nuo kitų. Antigeno ruoželių ryškumas koreliuoja su antikūnų titru.
  • Naudojami antigenai yra itin gryni, dažniausiai išskiriami naudojant afininės chromatografijos metodą. Membranos juostelėse nėra jokių pašalinių baltymų, galinčių nulemti nespecifinius teigiamus rezultatus.
  • Inkubuotas EUROLINE tyrimo juosteles galima saugoti ilgą laiką. Rezultatus lengva dokumentuoti.
  • Kiekybiniam EUROLINE tyrimo juostelių įvertinimui, lengvesniam duomenų valdymui ir visapusiškam rezultatų dokumentavimui EUROIMMUN sukūrė EUROLineScan programą. Iš pradžių inkubuotos EUROLINE tyrimo juostelės, naudojant stalinį skenerį, yra nuskenuojamos. EUROLineScan atpažįsta juostelių poziciją net ir netiksliai jas padėjus, atpažįsta ruoželius bei išmatuoja jų ryškumą. Tuomet šie rezultatai yra išsaugomi kartu su vaizdine medžiaga. Kiekvienam pacientui galima sukurti atskirą rezultatų lapą.
 
 

 

Daugiau informacijos: www.euroimmun.com